要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?kate_101

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/10 09:59:46

要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?kate_101
要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?
我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?
kate_1018 我想问下如果用到12%的胶，跑的时间足够长，预染marker的位置和10%的达到同样位置的时候，这样两条带的差别还是会小于10%的胶吗？你说的“用好点的材料制备凝胶”，是说用好点的丙烯酰胺和甲叉吗？你说的“将电泳电压在后半程调高可改善条带清晰度”，是有实际经验的吗？还是理论上的？我一般都是 80浓缩

要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?kate_101
一般凝胶浓度低是容易出现条带模糊的情况.个人手法是：用好点的材料制备凝胶来进行分析.10%的浓度可以用来分离这两种蛋白,将电泳电压在后半程调高可改善条带清晰度.也可以调高分离胶浓度至12%,但差别会较10%的更小.是在不行可以考虑用梯度胶分.
“用好点的材料”是说的丙烯酰胺和甲叉.
“将电泳电压在后半程调高改善条带扩散”,我分离胶用135V,缩短电泳时间.
两种浓度的差别也不是太大.为了扩大差别,可以通过预染marker来控制电泳时间,将小分子的蛋白跑出去,用更多的凝胶长度来加大两者的差别.不过电泳时间延长对条带清晰程度会有影响.
样品的pH也会对条带的清晰程度有影响,以前做分子量和你的差不多大的酵母样时,条带就有些模糊.其实有时只要能将两者区分开,不一定非要追求最佳分离效果.
个人观点,仅供参考!

浓缩胶5%
分离胶12%

试试看看吧！

我想分离55KD和62KD左右的蛋白,请问下用哪种蛋白Marker? 要分离77KD和80KD的两个蛋白,要用多大浓度的SDS-PAGE胶能有较好的分辨率?我目前用的10%的胶能看出来大小差别,但是不太明显?如果跑的时间长些,条带就会糊掉.用浓度高些是不是会好些呢?kate_101 40KD或50KD大小的蛋白用多大浓度的分离胶比较合适 western 想分开65和93kd的蛋白用多大浓度的分离胶为何我用凝胶层析分离一个蛋白样品,老只有一个峰?我的蛋白样品是个四聚体44KD的,上柱的样品里面含44KD,22KD,11KD的蛋白,SDS-PAGE是3条带,凝胶层析的凝胶是琼脂糖,分离范围是10KD到100KD,可是每次我要做westen,蛋白分子量大约7KD左右,需要多少浓度的分离胶啊?其具体配方是什么?7KD的蛋白需要多少浓度的分离胶? kd 35KD的蛋白,SDS-PAGE分离胶一般用多大的? 我做western,蛋白180KD,请问用多大浓度的分离胶即浓缩胶? 请问western blot 跑胶时积层胶和分离胶需要的电压是多大啊,还有转膜的,电压?我跑的蛋白有14kd到130kd的都有蛋白分子量单位kD和相对分子质量怎么换算分离与鉴定蛋白质已知植物叶绿体中的蛋白A分子量为72KD,由393个氨基酸组成,具有两个相同的亚基,其等电点为6.8-6.9,植物叶绿体内存在另一蛋白B分子量为73KD,具有四个相同的亚基,等电点为8.2-8 分离22KD的蛋白质选择什么型号的超滤膜【请问】怎样根据蛋白质大小确定SDS-PAGE电泳分离胶的浓度?比如我的蛋白20几个kD,分离胶的浓度需要多大? PLGA 50:50 的分子量12 kD,53 kD,143 kD中的kD是什么意思做western blot,怎样根据分子量的不同配置不同浓度的浓缩胶比如我要做的蛋白是HIF-1α,其分子量为120KD,应该配多少浓度的分离胶? 蛋白质电泳的分离胶浓度,我要跑的蛋白质有120KD的,还有90几KD的,该用多大浓度的分离胶呢?谢谢各位啦 D 和 KD 是什么单位,