关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢?

关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? 退火温度低会对PCR产生什么影响?我做菌落PCR,使用一个特异性上游引物和一个T7下游通用引物,退火温度用的是较低的48度,但引物的Tm分别为57,71,阳性对照都没有出结果,请问是怎么回事呢?退火 退火温度与引物的TM值有什么联系?为什么退火温度要比TM低5度左右最合适? 关于引物的退火温度?为什么用公式计算的引物退火温度和试剂公司送来的合成报告单上的退火温度不一致? 用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度Tm,看哪个? ISSR-PCR引物的退火温度问题我做ISSR-PCR引物的退火温度能不能直接使用primer5.0这个软件计算得出的退火温度.理论上来说这是最佳的退火温度吗? 求助巢式PCR退火温度的设定我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢? 我设计了引物,结果生物公司合成的引物退火温度比我设计的低10度,为什么,我用哪个退火温度 我的引物设计有30个碱基,tm值分别为88和84,是不是太高了?那退火温度怎么设定啊? 引物的退火温度如何计算,用tm值减去5度,靠谱不?用1m na+的还是50mmna+? 我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢因为55度买有扩出条带,所以我就温度往下走,没有往上调,38个循环参数,请问有哪位大侠能 TAILPCR 反应体系中退火温度一般是多少 和特异引物的TM值有什么关系吗 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, RT-PCR怎么都没法克隆出目的片段我用的上下游引物tm值相差较大,解决办法是先用低的退火温度跑5个循环,然后再用高退火温度的跑25个循环.试剂盒使用的是takara 一步法RT-PCR KIT请问各位针对这 我在做overlap PCR,两个片段一条736bp,一条255bp,20个重叠碱基,四个引物的TM值都是59度,两条都P出来了现在加入两端的引物,就是扩不出来1000的条带,这20重叠有13个是CG对,我不知道是不是退火温度的 用相同的引物做PCR和qPCR的退火温度是一样的吗?我看文献里的,好像不一样,为什么? ssr引物筛选我是做分子标记的,现在遇到一些问题?1、根据引物报告单上的退火温度,上游和下游温度不一样怎么选择?2、我有600对引物,3个亲本,现在要筛一遍,用96孔的PCR板P的时候,每一对退火