作业帮巢式PCR中的引物怎么设计
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/27 03:46:46
巢式PCR中的引物怎么设计
巢式PCR中的引物怎么设计
巢式PCR中的引物怎么设计
巢式PCR一般是有两对引物的,一对outer引物,一对inner引物.一般建议为了方便,inner引物直接根据目标序列来设计引物（和普通PCR引物设计方式一样）,而outer引物则从目标序列前后两端的序列开始设计,也就是说上下游各往前后移动一些碱基开始设计引物.outer和inner引物的设计应含有重叠区域,重叠区域一般为10bp比较合适.如果说你手上只有目标序列,没有目标序列前后的序列信息的话,你可以使用普通引物作为outer引物,之后再从序列内部设计一对inner引物,原则和之前也是一致的,也应含有10个碱基左右的重叠区域.这时候,因为你的inner引物PCR后产物会少一些碱基序列,你可以设计第三对引物,这对引物为outer和Inner引物的拼接序列,然后进行PCR,将缺失的碱基人工补上.
你想一步巢式还是想两步法巢式，如果两步法，那就跟常规PCR没啥区别。如果一步法，可以考虑外引物和内引物退货温度相差10度左右。