连接到T载体上面后,做双酶切,条带不正确,目的片段变大是什么原因

连接到T载体上面后,做双酶切,条带不正确,目的片段变大是什么原因 转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带（即之前的连接产物,约3k 我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 序列连在T载体上,用sacⅡ单酶切之后目的条带没有了（t载体有）,这是咋回事啊序列两端都是sacⅡ酶切位点 TA克隆全是阴性我把1400bp的片段连接到宝生物的PMD18-T载体上,转化后,全是白斑,但是挑了二十个全是空载体, 如何使DNA断裂,再酶切?DNA断裂后如何使其补平连接到T 载体上去！ 简述 如何将外源DNA连接到载体上 为什么篮斑做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢我用蓝白斑做的 T载体和目的片段连,为什么篮斑的 做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢? 有现成的质粒,无原始的菌种或菌液,如何对质粒进行扩增?目的基因先后连接到T载体和表达载体之后,接种到培养液中,培养液在摇床上培养12-16h后提取的质粒.现在质粒快用完了,但是目的基因 T载体质粒电泳条带pMD-18T 载体和目标cDNA片段链接后应该是形成的环状质粒,对其电泳的话条带应大概位于什么位置?T载体大概是略小于3000bp,我用的目标片段是600多,加起来若是线性的话电泳应 我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带!这是为神马?只连这个穿梭载体就已经连了两个月了,我快崩溃了! T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到 我PCR产物大小141bp,纯化后,连接到pGEM-T载体克隆,使用M13通用引物,扩增片段长度是多少?我想知道假如用pGEM-T通用引物M13F 5'TGTAAAACGACGGCCAGT3'和M13 RV 5'CAGGAAACAGCTATGACC3'引物进行菌液PCR,扩增出的片段 目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! 用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑 关于 克隆的问题.假如我有有一个基因片段,未知序列.我可以把它连接到T载体,然后PCRPCR 用T载体PRIMER,然后测序,然后酶切出片段---------》从而达到得到很多此片段的目的.这个做法行么?或者别 如果我把目的基因连接到质粒载体上,这个载体质粒又有多个启动子,我怎么知道它用那个启动的呢 载体中有启动子和终止子,如何将目的基因中的启动子和终止子去掉?并连接到载体中