作业帮植物根系活力的测定TTC法测定植物根系活力的实验方法,标准比色系列?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/28 00:41:23
植物根系活力的测定TTC法测定植物根系活力的实验方法,标准比色系列?
植物根系活力的测定
TTC法测定植物根系活力的实验方法,标准比色系列?
植物根系活力的测定TTC法测定植物根系活力的实验方法,标准比色系列?
实验材料、试剂与仪器设备 ：
（一）实验材料
水培或砂培小麦、玉米等植物根系.
（二）试剂
1. 乙酸乙酯（分析纯）.
2. 次硫酸钠（ Na 2 S 2 O 4 ,分析纯）,粉末.
3. 1 ％ TTC 溶液：准确称取 TTC 1.0 g ,溶于少量水中,定容到 100 mL .用时稀释至需要的浓度.
4. 磷酸缓冲液（ 1/15 mol/L , pH7.0 ）.
5. 1 mol/L 硫酸：用量筒取比重 1.84 的浓硫酸 55 mL ,边搅拌边加入盛有 500 mL 蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至 1000 mL .
6. 0.4 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸 4.72 g ,溶于水中,定容至 100 mL 即成.
（三）仪器设备
小烧杯 3 个,研钵 1 个,移液管： 0.5 mL 1 支、 10 mL 1 支、 5 mL 3 支,刻度试管 6 支,分光光度计,分析天平（感量 0.1 mg ）,电子顶载天平（感量 0.1 g ）,温箱,试管架,药勺,石英砂适量,滤纸.
实验步骤：
1. 定性测定
（ 1 ）配制反应液 把 1 ％ TTC 溶液、 0.4 mol ／ L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按 1:5:4 比例混合.
（ 2 ）把根仔细洗净,把地上部分从茎基部切除.将根放入三角瓶中,倒入反应液,以浸没根为度,置 37 ℃左右暗处放 1 ～ 3 h ,以观察着色情况,新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色,表明该处有脱氢酶存在.
2. 定量测定
（ 1 ） TTC 标准曲线的制作 取 0.4 ％ TTC 溶液 0.2 mL 放入大试管中,加 9.8 mL 乙酸乙酯,再加少许 Na 2 S 2 O 4 粉末摇匀,则立即产生红色的 TTF .此溶液浓度为每毫升含有 TTF 80 μg .分别取此溶液 0.25 mL 、 0.50 mL 、 1.00 mL 、 1.50 mL 、 2.00 mL 置 10 mL 刻度试管中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含 TTF 20 μg 、 40 μg 、 80 μg 、 120 μg 、 160 μg 的系列标准溶液,以乙酸乙酯作参比,在 485 nm 波长下测定吸光度,绘制标准曲线.
（ 2 ）称取根尖样品 0.5 g ,放入小烧杯中,加入 0.4 ％ TTC 溶液和磷酸缓冲液（ pH7.0 ）各 5 mL ,使根充分浸没在溶液内,在 37 ℃下暗保温 1 ～ 2 h ,此后立即加入 1 mol/L 硫酸 2 mL ,以停止反应.（与此同时做一空白实验,先加硫酸,再加根样品, 37 ℃下暗保温后不加硫酸,其溶液浓度、操作步骤同上）.
（ 3 ）把根取出,用滤纸吸干水分,放入研钵中,加乙酸乙酯 3 ～ 4 mL ,充分研磨,以提出 TTF .把红色提取液移入刻度试管,并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤 2 ～ 3 次,皆移入刻度试管,最后加乙酸乙酯使总量为 10 mL ,用分光光度计在波长 485 nm 下比色,以空白试验作参比测出吸光度,查标准曲线,即可求出 TTC 还原量.