如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线(包括基因和载体的连接、转化和鉴定)和关键点.

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/28 17:41:18

如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线(包括基因和载体的连接、转化和鉴定)和关键点.
如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线(包括基因和载体的连接、转化和鉴定)和关键点.

如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线(包括基因和载体的连接、转化和鉴定)和关键点.
已经得到扩增的目的基因片段和克隆载体→对两者分别进行酶切(选要相同的限制性内切酶对两者进行切割)→酶切产物经琼脂糖凝胶电泳回收→克隆载体和目的基因进行连接(一般选用T4连接酶)→大肠杆菌感受态细胞的制备(常见的有氯化钙法)→转化(将重组载体导入感受态细胞中)→将上一步得到的大肠杆菌进行涂板,倒置培养18-20个小时→筛选和快速鉴定(直接挑取单克隆菌落,进行菌落PCR,电泳检测PCR产物,挑取阳性克隆的菌落)

如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线(包括基因和载体的连接、转化和鉴定)和关键点. DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量 基因的PCR扩增与人工合成问题?如果目的片段比较短,小于50个bp,是采用PCR扩增还是人工合成呢? 进行PCR扩增时为什么要将目的基因连到载体上?直接对其进行扩增不行吗?如题!如果比加载体可以不用加引物,直接用水补充不可以吗? 能不能用PCR直接扩增目的片段,然后转入表达载体,代替在克隆载体或dh5a中的扩增 我PCR产物大小141bp,纯化后,连接到pGEM-T载体克隆,使用M13通用引物,扩增片段长度是多少?我想知道假如用pGEM-T通用引物M13F 5'TGTAAAACGACGGCCAGT3'和M13 RV 5'CAGGAAACAGCTATGACC3'引物进行菌液PCR,扩增出的片段 为什么构建克隆载体不需T4连接酶为什么PCR扩增出的DNA片段和克隆载体pMD 18-T连接不需T4连接酶,而和表达载体连接就需要T4连接酶. 约1800长度的片段,pcr扩增后显示长度合适,进行t-blunt载体克隆,转化感受态细胞,长出菌很少,甚至没有 PCR扩增出目的片段之后为什么要酶切?酶切下来的是目的片段和载体?然后再把它们连起来?很困惑. 如果用PCR方法扩增获得X基因片段,写出实验步骤和关键点!如果被采用, 为什么PCR能将特定的DNA片段扩增? 酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么做MUCIN基因 从扩增、 切胶纯化、 加A 、T载体链接、 转入感受态 到挑克隆鉴定出阳性克隆 最后提质粒 取一部分提出的质粒双酶切 质粒与酶 基因的构建与基因的克隆是指一个意思么?就是通过PCR扩增获得目的基因?问题很小白哈. 利用PCR技术进行基因扩增属于细胞水平的克隆吗 PCR扩增抗除草剂基因为什么是克隆? 双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶切位点,但现在将T载体进行双酶切,缺总是切不完全,只有大约1/3的载体被切开,所以200bp的条 目的基因先克隆入克隆载体再亚克隆入表达载体与直接将目的基因克隆到表达载体上有什么好处? 重组质粒双酶切带与PCR扩增带大小不一PCR扩增出1kb的带,双酶切(3h)切出的是2kb的带,和载体相比,切出的带不亮,有的根本看不清,可能是目的片段不浓,如果是质粒不纯,我是从单菌落来