高效液相色谱荧光检测仪出问题怎么办?

高效液相色谱荧光检测仪出问题怎么办?
高效液相色谱荧光检测仪出问题怎么办?

高效液相色谱荧光检测仪出问题怎么办?
转载：《分析测试百科网》
检测器故障和解决方法
1.检测器性质概述
检测器是液相色谱系统的“眼睛”,测量离开柱的样品的浓度或质量.光电检测器测量柱流出物的光吸收、荧光和折光率的变化.电化学和电导检测器溶液的变化.特殊的样品用特殊的检测器.不合适的检测器测得的结果也不可靠.
2.常出现的UV检测器故障
故障类型 故障率（%）
噪音 26
漂移 12
灵敏度 9
灯寿命 24
气泡 7 在检测生物样品时可能为主要故障
池污染 6
其他 8
无故障 11
3.具体故障与解决
a.灯故障主要是灯失灵或能量衰减以及灯引起基线噪音.
除EC外,检测器中灯是重要部件.灯失灵,明显地引起检测器信号总下降.多数检测器有观察孔或指示器,由此可看见灯工作的情形.但是不可以直接观察紫外灯,因为紫外线会损伤眼睛.
基线噪音这是灯失灵更普遍的故障.氘灯打开后有30分钟的最大噪音,所以每次使用前至少预热30分钟.
换灯时要注意不能在灯上留下指痕.因为未擦去的指痕在开灯后会引起灯表面永久性的损害.请用软布或专用擦镜纸握住灯,在开灯之前用棉签蘸取甲醇擦去.新装上后至少要点燃1小时以上,才能开始定量分析.
b.池故障与解决
气泡是最常见故障.瞬间而过的气泡会在色谱图上出现长噪音尖峰.若感觉到有气泡,当将等调整670nm左右,戴上防护眼镜便可以看到池内有一个圆环,并不是清晰地绿色图像.流动相脱气不足会产生气泡,池污染会使得故障加重.用充分脱气的流动相可以带走气泡,或用强溶剂通过系统.在正相和反向系统转换的时候一定要过渡.
检测器阻塞有下列现象：系统压力升高,松开检测器进口的接头压力降至正常水平.检测器部分易发生的地方为进口管道或热交换器、池本身和出口管道.用一般的净化的溶剂去掉阻塞可能不奏效但可以试试.若是厂家标明耐高压,可用泵打溶剂反冲,常可以去掉堵塞.压力不要超过6MPa.正常的池不可用此法,一般情况请咨询厂家的维护工程师较好.
c.池阻塞和污染,如确定是池堵塞,可用注射器回抽溶剂或用泵反冲（耐高压）,一般能疏通.通常此故障较少发生,而污染是经常发生的.池污染一般是色谱图的噪音增大,灵敏度降低甚至不出峰,也提高了气泡的故障率.清洗池前向拆去柱和排空管道,准备好防护用品,如眼睛、围裙、橡胶手套等.池进出口都接上细管径的聚乙烯管.进口管上接10ml的注射器,出口管没入异丙醇中.清洗程序如下：回抽10ml异丙醇通过池去掉流动相残留. 回抽10ml蒸馏水 回抽10ml6mol/L硝酸,通过池去掉沉积物,此步应小心,要备有防止酸溢出的应急措施 回抽20ml蒸馏水 至少用100mlHPLC级别的水正向通过池.
d.池渗漏可能发生在接头、池窗的密封垫上,也可能发生在样品池或参比池的一侧,或者是石英窗破裂.除了接头松动,池渗漏也可能是管道阻塞、流速较高、池后的阻力大,使池的横截面承受过高的压力,严重地引起池破裂.也可能组装不当、垫圈不密封造成的渗漏等.没有多大把握最好请厂家来维护.
e.测量和参比池配合不当,正常情况下UV检测器用空气做参比,电路设计也无流动相本地.用有紫外吸收的流动相通过UV检测器,或是用示差折光检测器都要在参比池内注满流动相.如参比池中流动相不与测量池中的流动相一样,本底输出信号不为零,进样时有可能出伪峰或倒峰.从湿参比池换成空气参比池时,要清洗干净后用干燥的氮气吹干,不能留下溶剂残留,否则就出“气泡样”的故障.
f.波长方面的问题主要是次级发射效应、选择波长不正确、波长的装置差、波长校正问题、低波长测量问题和单色器等问题.
次级发射效应在可见光范围内,使用氘灯做光源可提高灵敏度,但是带来了次级发射效应.单色器能发射比设定值高一级的发射光,正好是设定值的一半.如设定值在405nm,次级发射光正好是202.5nm,三级发射光低于干扰波长之下,由于大气中的氧所吸收.次级发射光正好在紫外光范围内,即是检测器在两种波长下检测,违反了比尔定律,结果是非线性的.我们可以用钨灯在紫外范围内无次级发射,但是灵敏度下降.用氘灯在高于360nm测定,应考虑有次级发射的可能.在荧光检测器中,也有这个问题存在.
选择波长不正确可影响实验结果的精确性,如有可能应选择在干扰组分的吸收光谱平稳的范围或组分的最高吸收处.在所选波长太靠近流动相的吸收范围,梯度洗脱时会增加基线漂移.
波长的装置差,可变波长UV检测器所采用的机械转动光栅选择波长.旋转和光栅间的传动装置由齿轮和杆组成,用久了会机械磨损,所选的波长并不真正是您选择的波长.
波长校正问题我们可以用铬酸钾在275nm校正吸收波长等方法来处理.
低波长测量问题是我们在采用低波长时,样品和流动相的变化比在高波长下更灵敏.我们要选择应选择低波长吸收较小的溶剂,通常是乙腈好于甲醇.
单色器问题主要是光栅和镜子蒙上一层污染物,一般这种情况请厂家维护较好.
g.时间常数是相应时间的设定,起着过滤噪音的作用.有些有固定的时间常数,有些需要自己设定.如果太小可能增加短噪音,时间常数太大可能出宽峰、峰拖尾和短峰.可用自己的经验估算时间常数,即选最窄的有关峰宽的10%作为时间常数.
h.泵噪音主要引起检测器折射率的变化与流动相的组成、压力以及温度由引起的噪音.一般情况要加阻尼器,特别是RI检测器对波动十分敏感.
I.温度的影响,主要是环境温度变化常引起基线漂移,一般情况请使用柱温箱等设施或环境温度波动的控制.
j.混合问题,主要是流动相不完全混合可出现周期性的基线变化,在示差折光检测器非常严重,如果改用手动混合相对较好.特别是比例悬殊太大时最明显.
k.线性问题,主要因为检测器或方法上的问题,非线性响应是可能的.如仔细稀释样品、选择波长,良好的方法可以延长线性范围.检查线性要在一定的浓度范围内,用不同浓度的标准品证实线性的相关性；用几乎澄清的溶剂做流动相可扩展线性范围,用强紫外吸收的流动相检测器线性范围几乎不到零,建议用无吸收的流动相或在流动相无吸收的波长下检测.
l.信号线故障主要是记录器和数据系统连接检测器的信号线引起的.要注意正负是否接对或线路松动、接触不良.另外就是有良好的接地装置.
m.内部自检没有通过,我们可以通过其提示信息参阅手册来解决,最好咨询厂家维护工程师.
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