RT-PCR,自己前后引物Tm差7度,前引物63度,后引物58度,退火温度如何设置?

RT-PCR,自己前后引物Tm差7度,前引物63度,后引物58度,退火温度如何设置? 最近在做实验RT-PCR,我做RT-PCR,一对引物Tm值分别是52.2,54.6.目的片段1062,PCR反应条件怎么设置呀 rt pcr的引物设计 设计PCR引物时Tm温度有没有具体要求?比如说,Tm必须小于72度,或大于72度? 求助巢式PCR退火温度的设定我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢? PCR引物的成分是什么RT RT-PCR实验 为什么RT只加反义引物PCR要加正义引物和反义引物 引物分哪几种?扩基因所用的引物和做RT-PCR的引物一样吗? 为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀?还有,好多的Tm值都代表什么呢?引物Tm60多,二级结构的Tm达到40度有关系吗?G值有什么用 PCR中 两个引物的Tm值相差太大有什么害处? 如果从primer5中得到引物的tm 值怎么确定pcr温度 实时荧光定量PCR 的引物能不能用来做RT RT-PCR和巢式RT-PCR的引物有区别吗 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? 做RT-PCR设计引物时,找引物序列有哪些好方法? RT-PCR只有引物二聚体而没有目的条带怎么办?我已经重新设置引物了 退火温度低会对PCR产生什么影响?我做菌落PCR,使用一个特异性上游引物和一个T7下游通用引物,退火温度用的是较低的48度,但引物的Tm分别为57,71,阳性对照都没有出结果,请问是怎么回事呢?退火