作业帮菌落PCR怎么做有人用菌落做过PCR吗,假阳性高吗,效果怎么样啊
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/28 13:28:34
菌落PCR怎么做有人用菌落做过PCR吗,假阳性高吗,效果怎么样啊
菌落PCR怎么做
有人用菌落做过PCR吗,假阳性高吗,效果怎么样啊
菌落PCR怎么做有人用菌落做过PCR吗,假阳性高吗,效果怎么样啊
如果是革兰氏阴性菌比如大肠杆菌还好,阳性菌几乎不能成功,因为有很厚的胞壁没法破壁.而阴性菌成功率也不是很高,就用牙签在菌落上挑一点到pcr体系里.但要考虑的是即使鉴定出转化子后你怎么保存这个菌落?再回板上找那个被挑过的残存菌落吗?与其这样不如多花几个小时摇菌液再pcr吧
不是特别明白你所提出的问题， 能SPECIFIC一点吗？
根据我的理解， 你所说的是在做完TRANSFORMATION之后把接种的细菌涂盘， 其中理论上吞噬表达了目标质粒的细菌可以存活， 第二天当菌种长得肉眼可见的时候， 涂抹一点点用来做目标质粒的PCR， PCR成功的表明实验成功， 请问你问的是这个问题吗？
如果是
假阳性不高， 基本上是一种用来快速SCREENING的办...
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不是特别明白你所提出的问题， 能SPECIFIC一点吗？
根据我的理解， 你所说的是在做完TRANSFORMATION之后把接种的细菌涂盘， 其中理论上吞噬表达了目标质粒的细菌可以存活， 第二天当菌种长得肉眼可见的时候， 涂抹一点点用来做目标质粒的PCR， PCR成功的表明实验成功， 请问你问的是这个问题吗？
如果是
假阳性不高， 基本上是一种用来快速SCREENING的办法， 就是筛选出很可能成功的菌落。 当然最后的黄金标准仍旧是MINIPREP之后做SEQUENCING了。
做法就是统一配MASTER MIX， 也就是包含BUFFER， MGCL2， PRIMER FORWARD, PRIMER REVERSE， DDNTP， TAQ， 混匀后平均到PCR TUBE里面， 之后每个菌落标号号码， 用TIP的尖稍微抹一点点就好了。 注意抹的时候要在本生灯下做， 要小心点避免污染。 然后按照标号放PCR TUBE里面。 之后PCR然后跑胶就OK了。
我在国外读书， 学的都是英文的， 说的如果不太贴切或者是理解错误请见谅。
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